Стафилококки. Выявление резистентности к метициллину и другим b-лактамным антибиотикам методом скрининга — страница 3

Стерильный физиологический раствор. Стандарт мутности 0,5 по Мак-Фарланду. Стерильные тампоны или микропипетка (10 мкл). Термостат с температурой инкубирования 35oС. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА Исследование проводят при обязательном контроле роста испытуемых культур на агаре Мюллера–Хинтон с 4% NaCl без оксациллина (культуру наносят так же, как на агар с оксациллином). Контрольные штаммы: S.aureus ATCC 38591 – резистентный; S.aureus ATCC 29213 –

чувствительный. ПОСТАНОВКА ТЕСТА Приготовление инокулюма. Бактериальную взвесь стафилококка готовят из нескольких колоний с одинаковой морфологией на стерильном физиологическом растворе (3 мл) и доводят до мутности 0,5 по Мак-Фарланду (1,5·108 КОЕ/мл). Инокуляция. Метод I (микропипеткой): приготовить разведение 1:100 стандартного инокулюма 0,5 по Мак-Фарланду для получения бактериальной взвеси, содержащей 1,5·106 КОЕ/мл (например,

добавить 0,1 мл стандартной суспензии к 9,9 мл стерильного физиологического раствора); с помощью микропипетки нанести каплю (10 мкл) разведенной стандартной суспензии на поверхность агара с оксацил лином. Метод II (с помощью тампона ): погрузить стерильный ватный тампон в пробирку со стандартизированной суспензией (0,5 по Мак-Фарланду), затем отжать избыток влаги о стенку пробирки; коснуться тампоном поверхности агара с оксациллином.

ИНКУБАЦИЯ. Штаммы S.aureus инкубируются при температуре 35oС в течение полных 24 ч, а коагулаза(–) стафилококков – в течение 48 ч. Примечание. Среда АГВ не может быть рекомендована для постановки теста в связи с высокой частотой ложноположительных результатов. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТА Интерпретация: q  появление видимого роста более 1 колонии на месте нанесения культуры означает устойчивость данного штамма к оксациллину (метициллину); q 

при отсутствии роста на месте нанесения культуры исследуемый штамм учитывается как чувствительный к метициллину (оксациллину). q  при сомнительных результатах, а также для штаммов, выделенных у больных с клинически неэффективной терапией и у больных с серьезными инфекциями, необходимо провести развернутое исследование с определением МПК к оксациллину и гена mecA. Представление результата: q  S.aureus или коагулаза(–)

стафилококк (S.epidermidis), чувствительный к метициллину (оксациллину); q  S.aureus или коагулаза(–) стафилококк (S.epidermidis), резистентный к метициллину (MRSA или MRSE). Метициллино (оксациллино) резистентные стафилококки должны расцениваться как резистентные ко всем b-лактамам – пенициллинам, цефалоспоринам, карбапенемам, комбинациям пенициллинов с ингибиторами b-лактамаз. Кроме того, среди метициллинорезистентных стафилококков очень