Стафилококки. Выявление резистентности к метициллину и другим b-лактамным антибиотикам методом скрининга — страница 2

стандартных in vitro тестах, в то время как при гетерогенном типе только небольшая часть клеток проявляет резистентность фенотипически. Нередко только 1 из 10–100 млн клеток в популяции с наличием гена mecА экспрессирует резистентность, что обусловливает получение пограничных результатов при определении чувствительности к оксациллину (МПК – 2–8 мг/л). Резистентность, обусловленная гиперпродукцией b-лактамаз и мутацией нормальных

ПСБ, также приводит к получению пограничных значений МПК. Однако резистентность к оксациллину, обусловленная гиперпродукцией b-лактамаз, легко отличается от классической резистентности по ее обратимости при использовании ингибиторов b-лактамаз. В отличие от штаммов с классической резистентностью гиперпродуценты b-лактамаз и штаммы с мутациями нормальных ПСБ обычно не имеют множественной резистентности к другим

антибиотикам. Наличие классической резистентности наиболее легко определить методом скрининга, так как рост микробных клеток с неклассическими типами резистентности обычно ингибируются. Для определения чувствительности используется оксациллин ввиду его более высокой стабильности при хранении по сравнению с метициллином. ПРИНЦИП Для идентификации резистентности к оксациллину (метициллину) у стафилококков необходимо

соблюдение следующих условий: q  NaCl в агар с оксациллином (pH 7,2–7,4, так как при более низком pH увеличивается число ложноотрицательных результатов); q  температура инкубации 35oС; q  длительность инкубации 24 ч для S.aureus и 48 ч – для коагулазоотрицательных стафилококков; q  стандартизированное число микроорганизмов. МИКРООРГАНИЗМ Чистая культура Staphylococcus spp., инкубированная в течение 18–24 ч на кровяном агаре. МАТЕРИАЛЫ Агар

Мюллера–Хинтон с добавлением 4% NaCl (4 г на 100 мл среды) и 6 мг/л оксациллина (0,6 мг на 100 мл среды). Агар Мюллера–Хинтон хранится при температуре 2–8oС, готовится согласно прописи на этикетке, 4% NaCl добавляется до автоклавирования. Субстанция оксациллина с известной активностью предварительно растворяется в стерильной дистиллированной воде (расчет концентрации оксациллина проводят с учетом его активности) и добавляется в

охлажденный на водяной бане до 48 –50oС агар Мюллера –Хинтон. Приготовленный агар разливается по чашкам с толщиной слоя 3–4 мм (на чашку диаметром 100 мм – 25 мл). Готовые чашки со средой хранятся в пластиковых пакетах при температуре 4 –8oС не более 5 сут. Для контроля роста необходимо также приготовить чашки с агаром, содержащим 4% NaCl, но без антибиотика. Кровяной агар с чистой культурой стафилококка, инкубированной в течение 18 –24 ч.