Способы получения ферментов — страница 7

  • Просмотров 1604
  • Скачиваний 12
  • Размер файла 62
    Кб

составляло около одной десятой от того, что требовалось в случае Lactabacillus deilbruckii. Эффективность флокуляции зависела от температуры, физиологического «возраста» культуры, характера суспендирующей среды и особенно от фактических усилий сдвига, воздействовавших; на клетки перед флокуляцией. 2.2 Остатки клеток и белки Получающиеся после разрушения микробных клеток (для выделения внутриклеточных ферментов) остатки клеточной

оболочки обычно подлежат удалению из смеси до того, как она будет подвергнута фракционированию с целью получения различных белковых компонентов. Остатки клеток при механическом разрушении последних колеблются в размерах от нескольких микрон до долей микрона и поэтому трудно подвергаются извлечению из смеси. На помощь в этом случае приходят флокуляция и коагуляция клеточных остатков. Однако весьма существенно, что такие

методы обработки суспензий приводят к переводу в нерастворимое состояние также и внутриклеточных ферментов. В отношении седиментации клеточных остатков эффективными коагулянтами оказались квасцы. Однако они переводят белок в нерастворимое состояние с образованием мелких, медленно оседающих, нерастворимых флокул. Флокуляция или коагуляция ферментов с целью получения нерастворимых белковых агрегатов представляет собой

достойную альтернативу классическим методам осаждения, которые требуют высоких концентраций реагентов. На протяжении ряда лет с целью выделения внеклеточных ферментов из культуральных жидкостей использовалась дубильная кислота. В концентрациях 0,1 —1,0 % она образует легко фильтрующиеся осадки. Флокулы содержат достаточно устойчивые ферменты и могут быть промыты ацетоном для удаления дубильной кислоты. В случае применения

таких носителей, как крахмал (2— 5 %), при высушивании флокул может быть достигнуто 100-кратное увеличение концентрации ферментов. Непосредственное высушивание в отсутствии носителя обеспечивает 500- кратное увеличение концентрации. Флокулы обладают тем недостатком, что трудно подвергаются растворению. 3. Центрифугирование Отделение твердых частиц от жидкостей представляет собой основную операцию в процессе выделения

ферментов. Оно включает выделение клеток из культуральной жидкости, удаление клеточных остатков, сбор осадка и выделение адсорбентов белка из белоксодержащей надосадочной жидкости. Общепринято также включать в эту операцию отделение растворенных макромолекул от растворителя с помощью ультрацентрифугирования. 3.1 Сигма-анализ Определенные трудности при сепарировании биологических частиц центрифугированием проистекают