Серологические реакции — страница 9

  • Просмотров 16180
  • Скачиваний 471
  • Размер файла 22
    Кб

наносить; по стенке пробирки сте- кает под слой АГ) Инкубация несколько минут. Зона помутнения свидетельствует о присутствии АГ в материале. 2)  _ 2Нефелометрические, тербидиметрические методы Принцип нефелометрии заключается в измерении количества све- та, рассеиваемого частицами (ПИК) в жидкой среде. Для нефело- метри оптимальны растворы низкой концентрации (в отличие от турбидиметрии, для которой оптимальны растворы

высокой концент- рации, поскольку в этом случае измеряется потеря проходящего света).  5Чувствительность метода - 100 мкг/мл антител или антигена  5при исследовании цельной сыворотки и 1 мкг/мл при исследовании  5чистых растворов. Данным методом можно проводить до 120 анали-  5зов в час. Время образования ИК можно значительно сократить,  5если ее проводить в 4% полиэтиленгликоле с М. 6000Д. 3)  _ 2Метод преципитации в геле

по Оухтерлоню Стекла или чашки Петри заливают 1-2% агаром или агарозой. После застывания агара вырезают по трафарету лунки. В одни лун- ки вносят исследуемые сыворотки (препараты), в другие, располо- женные напротив - соответствующие антисыворотки. Пластины инку- бируют во влажной камере в течение 24-48 часов. Варианты постановки: - 2 лунки (диаметром 3-5 мм) на расстоянии 3-5 мм друг от друга (одна с АТ, другая с АГ); - в центре лунка с

антисывороткой, вокруг лунки с разными пробами АГ-содержащего материала (или наоборот, в центре - АГ, по периферии - АТ); - бороздка (или полоска пропитанной фильтровальной бумагой, наложенной на агарозу) с антисывороткой (АТ-ми), по бокам лунки с АГ или бляшки микробов, синтезирующих токсин (определение токсигенности дифтерийной палочки). 4)  _ 2Метод преципитации в геле по Манчини  _ 2(метод радиальной иммунодиффузии - РИД) /

\---- зона преципитации │ о--│---- лунка с точно дозированным количеством \ 4--- 0/ сыворотки Метод количественного определения антигенов основан на изме- рении диаметра кольца преципитации, образующегося при внесении исследуемой сыворотки в лунки, вырезанные в слое агара, в кото- ром предварительно диспергирована моноспецифическая антисыво- ротка. В слое агара пробойником вырезают лунки диаметром 2 мм на расстоянии 15мм

одна от другой. В лунки первого ряда вносят с помощью микрошприца по 2мкл антигена (или стандартной сыво- ротки) в разведениях 1/1, 1/2, 1/4, 1/8. Лунки следующих рядов заполняются испытуемыми препаратами. Пластины инкубируют во влажной камере в течение 24 часов (пластины с анти-Ig M сыво- роткой - 48 часов). По окончании инкубации измеряют диаметры колец преципитации. Концентрацию антигена определяют по калиб- ровочной кривой. Например,