Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК — страница 13

  • Просмотров 1602
  • Скачиваний 28
  • Размер файла 245
    Кб

оценку исследуемой матрицы. Это имеет важное значение для решения задач в области развития фундаментальных и интегральных наук, а так же оптимизации условий методов диагностики. Итак, два метода, ставшие уже традиционными для некоторых областей науки и прикладных технологий, на ряду со своими недостатками имеют совершенно уникальные достоинства. RealTime ПЦР: дает возможность оценивать количество исходной матрицы; не требует

дополнительных трудоемких этапов работы; отсутствие стадии электрофореза позволяет минимизировать риск контаминации и таким образом уменьшить число ложноположительных результатов; использование математических методов анализа позволяет проводить автоматическую интерпретацию полученных результатов и снимает проблему субъективной оценки электрофореграмм; обеспечивает менее строгие требования к организации

ПЦР-лаборатории и автоматической регистрации и интерпретации результатов; позволяет экономить время. Биологические микрочипы: позволяют миниатюризировать образец и анализатор; экономит время и стоимость анализа; позволяет одновременно определять несколько параметров исследуемого образца; убладает высокой чувствительностью амплификационных методов, специфичностью и воспроизводимостью; обеспечивает простоту процедуры

выполнения работы. Возможно , что объединие этих методов за счет перевода полимеразной цепной реакции в формат микрочипов позволит создать диагностическую систему нового поколения, которую будут характеризовать следующие качества : более высокая чувствительность и, главным образом, специфичность определения нуклеиновых кислот, высокая производительность при низкой себестоимости выполнения анализа, общее сокращение

количества манипуляций в пределах каждого этапа анализа. Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Поставив перед собой цель объединить преимущества методов, мы столкнулись с рядом препятствий, касающихся инструментального обеспечения исследования. Проведение полимеразной цепной реакции в микрообъеме требует определенного технического оснащения. Современный рынок предлагает микропланшеты, объем лунок которых составляет не менее 200

мкл. Проведение ПЦР в микрообъеме в подобных планшетах противоречит условиям нашего эксперимента. Кроме того, современные амплификаторы не позволяют манипулировать формами термоблоков. В связи с этим перед началом исследований необходимо было создание экспериментальной аппаратной базы для амплификации и регистрации сигналов, изготовление микропланшетов с лунками, общий объем которых не должен превышать 2 мкл. 2.1.