Проект биолаборатории и технологическая карта производства пириформина — страница 7

  • Просмотров 474
  • Скачиваний 13
  • Размер файла 34
    Кб

10г с точностью 0,01г и переносят в колбу со 100 мл стерильной воды и стерильным крупнозернистым песком. Колбу закрывают стерильной пробкой и взбалтывают ее содержимое в течение 5 минут. Разведение препарата в приготовленной взвеси составляет 1:10 Параллельно готовят 7-9 пробирок, в каждую из которых добавляют по 9 мл дистиллированной воды, закрывают ватными пробками и стерилизуют. Затем готовят серию последовательных разведений. Для

этого из колбы чистой пипеткой берут 1 мл суспензии и переносят в первую пробирку с 9 мл воды, получают разведение 1:100. Суспензию этого разведения тщательно перемешивают с помощью новой (чистой) пипетки, затем берут 1 мл полученного разведения и переносят его во 2 пробирку (разведение в 1000 раз). Для каждого нового разведения необходимо использовать отдельную стерильную пипетку Камеру Горяева с хорошо притертым стеклом заполняют

суспензией соответствующего разведения. Количество спор подсчитывают в 5 больших квадратах камеры (или в 20-100 малых квадратах), определяют среднее количество клеток в 1 малом квадрате и рассчитывают по формуле Х=N×4×106, Где Х – титр исследуемой суспензии клеток/1 мл N – среднее количество клеток в одном малом квадрате Для определения титра исходного препарата необходимо титр исследуемой суспензии умножить на соответствующее

разведение. Определение титра методом посева на питательную среду Готовят серию последовательных разведений как указанно в предыдущем методе. Из трех последних разведений, предварительно тщательно перемешанных, производят посев в чашки Петри на агаризованную среду Чапека или сусло-агар из расчета 1 мл суспензии на чашку. Этот объем распределяют по поверхности среды шпателем. Из одного разведения делают не менее 5

параллельных высевов. Для параллельных высевов из одного разведения можно пользоваться одной стерильной пипеткой и одним шпателем. Засеянные чашки помещают в термостат с температурой 23-250С. Первый учет роста гриба проводят через 4-5 дней после посева, а затем через каждые 2-3 дня отмечают вновь появившиеся колонии антагониста. Титр препарата вычисляют по формуле: Т=А+К Где Т – титр препарата, спор/1г А – среднее число колоний,

выросших при высеве из данного разведения (среднее арифметическое из 5 чаш Петри) К – разведение, из которого произведен высев. При использовании чашечного метода все операции необходимо проводить в стерильном боксе [5]. 2.7. Техника безопасности При производстве пириформина следует соблюдать общие правила безопасности в микробиологических лабораториях При изготовлении суспензий необходимо пользоваться пипеткой с резиновой