Проект биолаборатории и технологическая карта производства пириформина — страница 6

  • Просмотров 472
  • Скачиваний 13
  • Размер файла 34
    Кб

стерильную среду, когда она остынет, вносят кусочек культуры из чашки Петри возле пламени спиртовки. Культуру растят на качалке (скорость 150-240 об/мин) при температуре 26±30С. За это время в среде образуются мицелиальные клубки, которые затее распадаются на короткие гифальные тела. Готовый инокулят содержит до 105 гиф/мл среды. Потребность инокулята для засева культуры – 5% от объема инокулируемой среды, стартовый титр при этом

составляет от 103 до 5х103 гиф/мл. Культивация Культивация проводится в ферментере. При его отсутствии несложно изготовить заменитель из стеклянной бутыли объемом 10 литров и более. Для хорошей аэрации по размеру горловины емкости изготавливается резиновая пробка, с тремя отверстиями. Одно отверстие (Ø20-30мм) необходимое для инокуляции, два других Ø 10-15 мм – для подачи и отсоса или кислорода. Посевное отверстие закрывается

резиновой пробкой, к воздуходувным подводятся гибкие шланги по диаметру. Воздух подается и отсасывается через микробиологические фильтры для предотвращения заноса посторонней микрофлоры. Для культивирования готовится среда, состоящая из 1% соевой муки и 5% глюкозы. При использовании заменителей сои или глюкозы необходимо рН среды доводить до 7. Выращивание в емкостях на качалке. Емкость стерилизуют при 1 атм в течение часа,

заполняют средой на 1/5 часть объема, повторно стерилизуют при 0,5 атм 30 минут. В остывшую среду вносят инокулят в пламени горелки или в факеле. Культуру выращивают пять суток на качалке при 26±30С. К концу культивации в среде образуется до 106 покоящихся спор/мл, которые являются основным действующим началом препарата. [1] Высушивание, фасовка, упаковка. Субстрат со зрелой массой гриба высыпают в пластиковые или эмалированные кюветы

слоем не более 3 см и проводят сушку при 30…350С, хорошей вентиляции и периодическим перемешиванием. Влажность готового препарата не должна превышать 8%. Готовый препарат затаривают в мешки из крафт-бумаги. Каждый мешок маркируют с указанием номера партии, вида субстрата, даты изготовления препарата, титра, срока и условий хранения. Так же необходимо приложить инструкцию по применению пириформина [5] 2.6. Контроль качества и

стандартизация пириформина Для определения количества жизнеспособных спор в готовом препарате используется два метода: прямой подсчет в камере Горяева и метод высева на твердую питательную среду в чашках Петри. Определение титра в камере Горяева. От каждой партии препарата отбирают 3-5 проб из разных мест по всей глубине и составляют общую пробу массой 70-100 г. Общую пробу тщательно перемешивают, после чего отвешивают навеску