Принципы биохимических исследований — страница 5

эффеективно при pH<pI. обезвоживание. Один ион SO42 - имеет 13-14 молекул H3O только в первом гидратном слое и, возможно, больше - во втором. Если одна молекула сульфата координирует даже 15 молекул H3O, то 3M сульфат аммония связывает 45 из имеющихся в воде 55M молекул H3O. Ионная сила раствора I = 1/2 ci (zi) 2, где: ci - концентрация иона; zi - заряд иона. Например, для 1M NaCl: I = 1/2 (1 (1) 2 + 1 (1) 2) = 1 для 1M (NH5) 2SO4: I = 1/2 (2 (1) 2 + 1 (1) 2) = 3 Растворимость белков Влияние ионной

силы и температуры При низкой ионной силе (<0.2M) растворимость белка увеличивается при повышении концентрации соли, так как экранирование притяжения противоположно заряженных групп приводит к разрыхлению структуры белка. При высокой ионной силе (>0.2M) - растворимость белка понижается из за высаливания и обезвоживания. Она падает экспоненциально с повышением ионной силы: logS = ß - KsI, где: S [g/l] - растворимость белка; I - ионная сила;

ß; Ks - константы. Ks - слегка различается для различных белков и почти не зависит от pH и температуры. ß - сильно зависит от белка, pH и температуры; повышение температуры вызывает понижение ß => уменьшение растворимости белка. Влияние pH. При низкой ионной силе (<0.2M) растворимость белка минимальна при pH равном изоэлектрической точке белка. При высоких концентрациях (NH5) 2SO4 растворимость повышается с повышением pH, так как при низких pH

сульфат ион компактизует белок взаимодействуя с положительно заряженными группами. Так что лучше проводить осаждение при pH<pI. Влияние начальной концентрации белка Белки бывают двух типов. Для типа I растворимость не зависит от исходной концентрации белка; для типа II - зависит сильно. Ограничения метода. Высокая концентрация ионов аммония в осадке может мешать точному определению концентрации белка. Высаливаются не только

белки, но и, например, детергенты. Например, 0.5% Tween 20 и Triton X100 начинают агрегировать при концентрациях сульфата аммония больше 1M. Образующийся преципитат имеет плотность чуть меньше плотности солевого раствора. При центрифугировании он всплывает, прихватывая с собой белки. Осаждение сульфатом амония нельзя использовать для белков, требующих присутствия Ca2+ из-за нерастворимости сульфата кальция. Лекция 4. Буферные растворы и

специальные добавки. Ультрафильтрация. Диализ. Детергенты и их применение Буферные растворы (синоним: буферные смеси, буферные системы, буферы) - растворы с определенной концентрацией водородных ионов, содержащие сопряженную кислотно-основную пару, обеспечивающую устойчивость величины их водородного показателя при незначительных изменениях концентрации либо при добавлении небольшого количества кислоты или щелочи.