Получение ферментных препаратов выращенных глубинным способом — страница 11

  • Просмотров 1176
  • Скачиваний 12
  • Размер файла 287
    Кб

культуральной жидкости, реже – биомасса продуцента или водный экстракт из поверхностной культуры продуцента. Ферментные препараты могут быть получены в виде порошков или жидких концентратов. В процессе выделения происходит повышение доли активного белка в общей массе препарата, т. е. увеличивается его удельная активность. Например, в таблице 1 показаны стадии очистки от сопутствующих ферментов и балластных веществ культуры

Endomycopsis sp. 20-9. Анализ таблицы 1 показывает, что чистота глюкоамилазы в препарате возросла в 37 раз, в препарате отсутствует гликозилтрансфераза, а α-амилазная активность может быть отнесена за счёт действия глюкоамилазы, так как использовался колориметрический метод определения активности α-амилазы. 1.3.1 Принципиальная схема получения ферментных препаратов Схема очистки фермента от балластных веществ сводится к освобождению

его от нерастворимых веществ, сопутствующих растворимых веществ и других ферментов. Процессы получения очищенных препаратов из поверхностных и глубинных культур несколько различны. Из поверхностных культур труднее получить высокоочищенные препараты из-за большого количества балластных веществ. Из глубинных культур получить очищенные препараты несколько легче, но при этом приходится вести выделение из разбавленных

растворов, если выделение ферментов проводится из жидкой части культуры. Выделение осложняется, если фермент внутриклеточный, и тогда необходимо разрушать клетки микроорганизмов. Принципиальную схему выделения и очистки ферментов из глубинных и поверхностных культур микроорганизмов можно представить в виде следующей схемы. Из схемы ясно, что экстракт из поверхностной культуры или фильтрат культуральной жидкости является

исходным материалом для получения препаратов ферментов различной степени очистки. На первом этапе выделения отходом процесса является нерастворимая часть культуры – биошрот, содержащий нерастворимые включения среды и биомассу продуцента. Таблица 1 Стадии очистки Объём, мл Общее количество белка, мг Глюкоамилаэная активность Амилолитическая активность Трансглюкоэидазиая активность* общая, ед. удельная, ед./мг белка выход,%

степень очистки общая, ел. выход,% Исходная культуральная жидкость 1 200 13 600 28 500 2,1 100,0 1,0 9 500 100 Глюкоза,изомальтоза, Отделение биомассы, концентрирование, отделение 560 11 100 25 600 2,3 90,0 1,1 8 500 89,00 То же Осаждение ацетоном, растворение в воде 350 2 040 19 800 9,7 69,5 4,6 1 050 11,30 » Ультрафильтрация 55 1 610 18 200 11,3 64,0 5,4 860 9,10 » Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе 555 298 15 000 50,4 52,5 24,5 30,0 0,35 Нет Ультрафильтрация 16 250 13 450 54,0 47,2 25,7 27,5 0,29 » Гельфильтрование через акрилекс П-100