Метилотрофные бактерии - источники изотопно-меченных Н-2 и С-13 аминокислот — страница 4

  • Просмотров 737
  • Скачиваний 16
  • Размер файла 185
    Кб

штамм факультативных метилотрофных бактерий B. methylicum, продуцент L-фенилаланина. Для проведения адаптации был выбран ступенчатый режим увеличения концентрации 2Н2О в ростовых средах, так как мы предположили, что постепенное привыкание организма к 2Н2О будет оказывать благоприятный эффект на адаптацию. Этапы адаптации метилотрофных бактерий к средам, содержащим максимальные концентрации 2Н2О показаны на рис. 1 и схеме. Однако

вопреки нашим ожиданиям, штамм облигатных метилотрофных бактерий M. flagellatum обнаружил повышенную чувствительность к тяжёлой воде (ингибирование роста бактерий наблюдалось при концентрациях 2Н2О в среде 74,5 об.%) [3]. Дальнейшие эксперименты по адаптации с данным штаммом метилотрофных бактерий не проводились. В связи с этим в наших экспериментах по изучению уровней включения дейтерия в аминокислоты использовались препараты

культуральной жидкости и биомасса M. flagellatum, полученная со среды, содержащей 74,5 об.% 2Н2О и 1 об.% С2Н3О2Н. Раннее нами был описан метод адаптации штамма факультативных метилотрофных бактерий B. methylicum к росту при сохранении способности к биосинтезу фенилаланина на максимально дейтерированной среде [7]. В данной работе были исследованы образцы биомассы штамма B. Methylicum (рис.1), полученные в ходе многоступенчатой адаптации его к тяжёлой

воде на средах с различным содержанием 2Н2О (от 0; 24,5; 49,0; 74,5; об% до 98 об% 2Н2О). Поскольку данный штамм метилотрофных бактерий удалось адаптировать к максимальным концентрациям 2Н2О в ростовой среде, исследование уровней включения дейтерия в аминокислоты суммарных белков биомассы представлялось наиболее интересным. Факультативные метилотрофные Облигатные метилотрофные бактерии B. methylicum-источники бактерии M. flagellatum, 2Н-аминокислот

источники 2Н-и 13С- аминокислот Многоступенчатая адаптация бактерий к 2Н2О на средах, содержащих 0; 24,5; 49; 74,5; 98 об.% 2H2O B. methylicum, адаптированный M. flagellatum, к 98 об.% 2Н2О и 2 об.% С2Н3О2Н замедление роста на среде, содержащей 74,5 об.% 2Н2О Культивирование на средах, Культивирование на среде, содержащих различные концентрации содержащей обычную воду 2Н2О и 1 об.% 13СН3ОН Культуральная жидкость после биомасса биомасса Культуральная жидкость после

отделения от клеток отделения от клеток 2Н-секретируемые аминокислоты 13С-секретируемые аминокислоты Гидролиз суммарных белков в 4н. Ва(ОН)2 или 6 н. 2НСl ( в 2Н2О) 2Н-и 13С-аминокислоты в составе белковых гидролизатов Обработка DnsCl и CH2N2 Обработка ZСl Оценка уровней изотопного Обращённо-фазовая Обращённо-фазовая ВЭЖХ включения методом масс- ВЭЖХ метиловых Z-производных аминокислот спектрометрии метиловых эфиров дансил- аминокислот