Метилотрофные бактерии - источники изотопно-меченных Н-2 и С-13 аминокислот — страница 2

  • Просмотров 242
  • Скачиваний 13
  • Размер файла 185
    Кб

меченные аналоги С2Н3О2Н/13СН3ОН), и другие низкомолекулярные соединения, например, тяжёлая вода (2Н2О) [3]. Однако, высокие концентрации 2Н2О в ростовой среде могут вызвать ингибирование роста и развития метилотрофов [3]. Несмотря на негативный биостатический эффект, оказываемый тяжёлой водой на клетки, некоторые бактерии устойчивы к высоким концентрациям тяжёлой воды в среде [4], в то время как растительные клетки могут нормально

развиваются при концентрациях не более 50-75 % 2Н2О, а клетки животных не более 35 % 2Н2О [5]. В отличие от тяжёлой воды, при использовании 13СН3ОН в качестве источника метки нет необходимости проводить предварительную адаптацию культуры к изотопному субстрату, так как показано, что изотопный эффект 13СН3ОН незначителен [6]. Поэтому использование для получения 13С -аминокислот облигатных метилотрофных бактерий, которые способны

ассимилировать только метанол в качестве единственного источника углерода и энергии является очень перспективным. В плане раннее начатых исследований с метилотрофами по получению аминокислот, меченных стабильными изотопами, практический интерес представляет использование метилотрофных бактерий, особенно продуцентов аминокислот для получения целевых соединений за счет биоконверсии низкомолекулярных меченных

субстратов [7-10]. Традиционным подходом при получении аминокислот является культивирование штаммов - продуцентов на средах, содержащих изотопно-меченные субстраты и 2Н2О с последующим выделением меченных аминокислот как из культуральной жидкости после ферментации штаммов-продуцентов, так и из гидролизатов общего белка биомассы. Целью данной работы было изучение принципиальной возможности получения 2Н-и 13С-аминокислот за

счёт использования штаммов метилотрофных бактерий Brevibacterium methylicum и Methylobacillus flagellatum . УСЛОВИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА. Бактериальные штаммы. Исследования проводили с генетически маркированными штаммами метилотрофных бактерий, полученными из коллекции культур Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) Государственного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов: 1. - Brevibacterium

methylicum ВКПМ В 5652, лейцинзависимый штамм факультативных метилотрофных бактерий, продуцент L-фенилаланина. 2. - Methylobacillus flagellatum KT, изолейцинзависимый штамм облигатных метилотрофных бактерий, продуцент L-лейцина. В работе использовали 2Н2O (99,9% 2Н), С2Н3О2Н (97,5 % 2Н) и 13СН3ОН (97,5 % 13С), полученные из Российского научно-исследовательского центра “Изотоп” (Санкт-Петербург, РФ), а также N-диметиламинонафталин-5-сульфохлорид (дансилхлорид) (Sigma,