Масс-спектрометрическая оценка уровня включения дейтерия и углерода-13 в молекулы аминокислот бактериальных объектов

  • Просмотров 708
  • Скачиваний 15
  • Размер файла 277
    Кб

БИОТЕХНОЛОГИЯ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА УРОВНЯ ВКЛЮЧЕНИЯ ДЕЙТЕРИЯ И УГЛЕРОДА-13 В МОЛЕКУЛЫ АМИНОКИСЛОТ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ОБЪЕКТОВ @ О. В. МОСИН Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова, 117571, г. Москва, просп. Вернадского, д.86 Методом высокочувствительной масс-спектрометрии электронного удара исследованы уровни включения стабильных изотопов дейтерия 2H и углерода-13 13С в молекулы

секретируемых аминокислот L-фенилаланинпродуцирующего штамма Brevibacterium methylicum и L-лейцинпродуцирующего штамма Methylobacillus flagellatum и аминокислотные остатки суммарных белков биомассы при выращивании бактерий на средах, содержащих в качестве источников стабильных изотопов (2Н)метанол, (13С)метанол и 2Н2О. Также осуществлено включение L-[2,3,4,5,6-2Н]фенилаланина, L-[3,5-2Н]тирозина и L-[2,4,5,6,7-2Н]триптофана в бактериородопсин, синтезируемый Halobacterium

halobium ЕТ 1001. Для масс-спектрометрического анализа мультикомпонентные смеси аминокислот в составе культуральных жидкостей и белковых гидролизатов (гидролиз в 6 М 2НСl (3% фенол) и 2 М Ва(ОН)2), превращали в N-бензилоксикарбонил-производные аминокислот и метиловые эфиры N-диметиламинонафталин-5-сульфонил-производных аминокислот, которые препаративно разделеляли методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Полученные [2H]- и [13C]аминокислоты представляли собой смеси, различающиеся количеством включённых в молекулу изотопов. Уровни включения 2Н и 13С в молекулы секретируемых аминокислот и аминокислотные остатки суммарных белков биомассы меняются в зависимости от содержания меченых субстратов в ростовых средах и различаются для разных аминокислот (до 10% для L-лейцина/изолейцина и до 97.5% для L-аланина). Ключевые слова: стабильные

изотопы; метилотрофные бактерии; галофильные бактерии; выращивание на 2Н2О; изотопномеченые аминокислоты, бактериородопсин ВВЕДЕНИЕ Обогащение молекул стабильными изотопами (2Н, 13С, 15N и другие) в настоящее время является важным методом в разнопрофильных биохимических и метаболических исследованиях с использованием аминокислот и других биологически активных соединений (БАС) [1-3]. Тенденции к предпочтительному применению