Исследование процесса физиологической адаптации бактерий к тяжёлой воде — страница 8

  • Просмотров 488
  • Скачиваний 15
  • Размер файла 130
    Кб

процессе роста фенилаланин ингибировал ферменты собственного пути биосинтеза. Кроме того, не исключена возможность, что при ферментации без рН-статирования может происходить как обратное превращение секретируемого фенилаланина в интермедиаторные соединения его биосинтеза, так и ассимиляция фенилаланина клеткой для обеспечения собственных метаболических потребностей, что отмечено в других работах [27, 28]. Данные по

исследованию культуральной жидкости методом ТСХ показали, что кроме фенилаланина штамм B. methylicum синтезирует и накапливает в культуральной жидкости (на уровне 5-6 ммоль) другие аминокислоты (аланин, валин, лейцин, изолейцин), присутствие которых также подтверждалось масс-спектрометрическим анализом метиловых эфиров их DNS-производных. Табл. 2 Влияние изотопного состава среды на рост штамма B. methylicum и уровень накопления

фенилаланина в культуральной жидкости (КЖ) Номер Компоненты среды, % Величина Выход Время ген. Уровень опыта лаг-фазы биомассы накопле- Н2О 2H2О метанол [U-2Н]метанол часы % от кон- ния Phe троля в КЖ % от контроля 1 98 0 2 0 20 100 2.2 100 2 98 0 0 2 30 92.3 2.4 99.1 3 73.5 24.5 2 0 32 90.6 2.4 96.3 4 73.5 24.5 0 2 34 85.9 2.6 97.1 5 49.0 49,0 2 0 40 70.1 3.0 98.0 6 49.0 49.0 0 2 44 60.5 3.2 98.8 7 24.5 73.5 2 0 45 56.4 3.5 90.4 8 24.5 73.5 0 2 49 47.2 3.8 87.6 9 0 98.0 2 0 58 32.9 4.4 42.5 10 0 98.0 0 2 60 30.1 4.9 37.0 10’ 0 98.0 0 2 40 87.0 2.9 95.0 Так как данный штамм метилотрофных

бактерий удалось адаптировать к 2Н2О, исследование принципиальной возможности использования гидролизатов его биомассы для культивирования других штаммов продуцентов представлялось весьма актуальным. Следует подчеркнуть, что усваиваемость биомассы метилотрофов клетками эукариот составляет 85-99%, а производительность метилотрофов, измеренная по уровню конверсии метилового спирта достигает 50% [29]. При этом учитывалось, что

метилотрофные бактерии при росте на метаноле способны синтезировать большое количество полноценных белков (до 55% от веса сухого вещества) [30], а также некоторое количество полисахаридов (до 10%) [31], причем эта способность сохраняется при росте на средах, содержащих 2Н2О и [U-2H]метанол. Для выделения этих соединений из (2Н)меченой биомассы метилотрофных бактерий было необходимо проводить её гидролиз. Для этого использовали два

метода гидролиза биомассы - щадящий гидролиз путём автоклавирования в 0.5 н. растворе 2HCl (в 2H2O) (30 мин, 08 ати) и исчерпывающий гидролиз биомассы в 6 н. 2HCl (в 2H2O) (24 часа, 110 0С). В предварительных экспериментах было показано, что по-первому варианту гидролиза биомассы реализуется гораздо большая питательность суспензии метилотрофных бактерий по сравнению с гидролизом в 6 н. 2HСl. Поэтому мы отдали предпочтение этому методу проведения