Исследование клеточного цикла методом проточной цитометрии — страница 8

  • Просмотров 6418
  • Скачиваний 444
  • Размер файла 31
    Кб

культуры клеток асцитической жидкости, лимфоцитов периферической крови и фибробластов человека (V.G.Enchev, K.G.Tsanev, 1985). 4.Наиболее употребительные методики, используемые в цитометрии клеточного цикла. При проточной цитометрии можно сканировать от 100 до нескольких тысяч клеток в секунду, что позволяет очень быстро получить достоверные результаты. Однако таким способом можно анализировать только очень разбавленные клеточные

суспензии. Солидные ткани необходимо сначала дезагрегировать, что всегда сопровождается нарушением морфологии. Клетки монослоя обычно диспергируют обработкой трипсином в присутсвии ЭДТА.   Дезагрегация свежих солидных опухолей Методы дезагрегации клеток можно подразделить на три группы: –       ; –       ; –       методы выделения ядер Самые простые и быстрые методы дезагрегации

включают только механическую обработку тканей. Эти методы особенно хороши для рыхлых тканей (например, лимфатических узлов) и позволяет получать густые суспензии клеток за несколько минут. Для получения неочищенных клеточных суспензий можно использовать аспираты солидных опухолей, взятые с помощью шприца. Ферментативный метод позволяет получить достаточно концентрированную клеточную суспензию из разнообразных опухолей,

но при больших затратах времени. Для выделения ядер (обычно из тканей, частично дезагрегированных механическим путем) разработаны различные методы, основанные на использовании ферментов, детергентов или тех и других. Детальная процедура дезагрегации тканей, окрашивания препаратов, получения результатов и их анализа для суспензии ядер разработана Винделовом и др. (L.L.Vindelov, I.J.Christensen, 1990). Цель дезагрегации состоит в получении с

высоким выходом суспензии интактных изолированных клеток или ядер, достаточно хорошо соответствующей исходному образцу ткани. Выбор способа дезагрегации зависит от типа ткани, размеров препарата, целей исследования, а иногда от быстроты и стоимости метода. Суспендирование архивных препаратов, залитых в парафин Методика исследования ДНК с помощью проточной цитометрии суспензии ядер, полученной из заключенных в парафин

архивных препаратов, была впервые описана в 1983 г. (D.W.Hedley, M.L.Friedlander, I.W.Taylor, 1983). Эту методику можно использовать в модифицированном виде для анализа самых разнообразных опухолей. Это дает целый ряд преимуществ: –       ; –       ; –       парафиновые срезы легко транспортировать, что позволяет проводить цитометрические исследования в специальных центрах. Недостатки метода состоят в том,