Флуоресцентный метод исследования конформационных изменений альбумина в растворе — страница 21

  • Просмотров 3067
  • Скачиваний 27
  • Размер файла 3070
    Кб

физико-химических факторов (рН, температура, денатурирующие агенты), в белке происходят конформационные изменения, которые в свою очередь отражаются на функциях, выполняемых альбумином. Наличие таких остатков аминокислот как: тирозин, фенилаланин и, в особенности, триптофан позволяет с успехом использовать очень чувствительный физико-химический метод в аналитической химии – флуоресцентная спектроскопия. Благодаря открытию

зондов (красители, нековалентно связывающиеся с белком), например АНС, который в связанном с белком состоянии в сотни раз интенсивнее флуоресцирует, чем в несвязанном состоянии, стало возможным изучать очень тонкие конформационные изменения, происходящие в альбумине и в других белках в целом. 2 ОБЪЕКТ, ПРОГРАММА И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ Объектом исследования являлся бычий сывороточный альбумин фирмы «Sigma-Aldrich».

Целесообразность использования бычьего сывороточного альбумина для эксперимента по сравнению с человеческим сывороточным альбумином (ЧСА) заключается в том, что БСА имеет два триптофанила, а ЧСА только один, находящийся в поверхностной гидрофобной складке молекулы. Именно остатками триптофана обусловлен основной вклад в собственную флуоресценцию белка. Причём в молекуле БСА один триптофанил располагается там же, где и

триптофанил молекулы ЧСА, а второй спрятан внутри белковой глобулы. Если произойдёт разворачивание белка под действием каких-либо факторов, то внутренний триптофанил выйдет на поверхность и флуоресценция белка увеличится. В случае ЧСА увеличение интенсивности флуоресценции наблюдаться не будет. Полученные результаты исследований можно будет с полной достоверностью перенести на молекулу ЧСА, т.к. БСА и ЧСА отличаются друг

от друга на три аминокислоты и положением некоторых аминокислот, а в целом структуры этих молекул идентичны. Предметом исследования явилось изучение конформационных изменений и структуры альбумина в целом под действием физико-химических факторов. Программа исследований включала постановку и решение следующих задач: Исследование влияния сверхвысоких концентраций мочевины на конформацию альбумина. 2) Влияние свободных

радикалов на структуру молекулы альбумина. Методом изучения влияния сверхвысоких концентраций мочевины на конформацию альбумина была флуоресцентная спектроскопия. Параметр флуоресценции – интенсивность. Влияние свободных радикалов на структуру молекулы альбумина исследовали методом гель-хроматографии и флуоресцентной спектроскопии. Флюоресценцию растворов альбумина исследовали на спектрофлюориметре марки СМ 2203 Solar.