Флуоресцентный метод исследования конформационных изменений альбумина в растворе — страница 17

  • Просмотров 2967
  • Скачиваний 27
  • Размер файла 3070
    Кб

тела при данной температуре и имеющее длительность, существенно превышающую период световых колебаний. В зависимости от источников, вызвающих люминесценцию, она подразделяется на триболюминесценцию (механические деформации некоторых кристаллов), фотолюминесценцию (свет), сонолюминесценцию (звуковая волна – индуктор) и т.д. Спектральная область, обычно используемая для люминесценных измерений (200 – 800 нм), соответствует

электронным переходам в молекуле. Поглощение молекулой кванта света в этой области спектра приводит к переходу электрона на более высокий энергетический уровень. Поглощение света происходит за время порядка 10-15 с, что соответствует периоду колебаний световой волны. В течение этого времени заметно не изменяются ни положение, ни импульсы тяжёлых ядер и их относительное движение до акта поглощения света и сразу же после него

одинаковы. Молекула, попавшая на верхние колебательные уровни любого возбуждённого состояния, быстро теряет избыток колебательной энергии при столкновениях с окружающими молекулами. Это процесс колебательной релаксации. Безызлучательный переход между электронными состояниями одинаковой мультиплетности называется внутренней конверсией, аналогичный переход между состояниями разной мультиплетности –

интеркомбинационной конверсией [43]. Возможны два вида интеркомбинационной конверсии: переход S1 – S0 (из первого синглетного возбуждённого в основное синглетное состояние соответственно) и переход Т1 – S0 (из триплетного возбуждённого состояния в основное синглетное соответственно). Помимо безызлучательного перехода молекула может попасть в основное состояние S0, испустив квант люминесценции. Если квант был испущен с

синглетного возбуждённого состояния, то такой тип люминесценции называется флуоресценцией. Длительность флуоресценции составляет 10-8 – 10-10 сек. Возможен и другой путь излучательной релаксации возбуждённого синглетного состояния. Возбуждённая молекула может безызлучательным путём перейти в триплетный возбуждённый уровень с изменением спина. Это так называемое метастабильное состояние. Перейдя на триплетный уровень,

молекула может находится на нём примерно 10-3 – 10 сек, что значительно больше длительности синглетного возбуждённого состояния. Свечение, испускаемое при переходе молекулы с триплетного в основное синглетное состояние называется фосфоресценцией. Оcновными характеристиками, параметрами люминесценции являются её спектры, выход, длительность и поляризация [44]. Люминесценция белков может быть обусловлена аминокислотами,