Ферменты для молекулярной биологии и генетической инженерии — страница 3

  • Просмотров 683
  • Скачиваний 11
  • Размер файла 23
    Кб

также обеспечивающими «горячий старт», генетически модифицированной Taq -ДНК-полимеразы для секвенирования ДНК. Препараты ферментов имеют низкую себестоимость и ориентированы на массовое применение. По своим качественным характеристикам они соответствуют мировому уровню и широко используются в генно-инженерной и молекулярно-биологической практике в России. Из оригинальных ферментов и реагентов для генетической инженерии

учеными лаборатории проклонированы гены и созданы следующие препараты: ДНК-полимераза из Archaeoglobus fulgidus – гипертермофильного архейного микроорганизма (данный фермент лишь на 37% гомологичен Pfu-ДНК-полимеразе); АТФ-зависимая ДНК-лигаза из Archaeoglobus fulgidus; активатор Taq-ДНК-полимеразы – неспецифический ДНК-связывающийся белок, повышающий точность и эффективность работы Taq-ДНК-полимеразы; NС-белок вируса лейкемии кошек –

неспецифически ДНК/РНК-связывающий белок, повышающий эффективность работы M-MLV ревертазы; фрагмент тяжелой цепи моноклонального антитела к Taq-ДНК-полимеразе; Hot Start Compound (HS) – химически синтезированный олигонуклеотид, образующий комплекс с Taq-ДНК-полимеразой и ингибирующий ее активность при низкой температуре. Получение ферментов нуклеотидного обмена с улучшенными характеристиками В настоящее время в лаборатории планируется

создать новые ферменты с улучшенными свойствами для целей амплификации и модификации нуклеиновых кислот и провести масштабирование процессов их выделения и очистки. Стандартным подходом для улучшения свойств полимераз стало получение химерных белков, в которых к полимеразному домену присоединен неспецифический ДНК-связывающийся домен. Химерные полимеразы будут иметь улучшенные характеристики в точности и скорости

синтеза, процессивности, продуктивности, способности к синтезу протяженных фрагментов и устойчивости к высоким концентрациям солей. В соответствии с этой идеологией исследователи из лаборатории генетической регуляции биохимических процессов НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН работают над созданием химерных полимераз (традиционных из Thermus aquaticus, Pyrococcus furiosus и оригинальных из Thermotoga neapolitana, Archaeoglobus fulgidus) с описанным в литературе

ДНК-связывающим доменом Sso7d и проклонированным авторами из Thermus aquaticus термостабильным неспецифическим ДНК-связывающим доменом. Разрабатывается химерная M-MLV ревертаза с неспецифически ДНК/РНК-связывающим NC белком вируса лейкемии кошек; химерные 5’–3’-экзонуклеазы (структуроспецифические эндонуклеазы) (традиционные из Thermus aquaticus, Pyrococcus furiosus и оригинальные из Thermotoga neapolitana и Archaeo-globus fulgidus) с термостабильными неспецифическими