Динамическое поведение мембранных систем и липидно-белковые взаимодействия — страница 6

  • Просмотров 669
  • Скачиваний 16
  • Размер файла 241
    Кб

от ориентации дипольного момента перехода молекулы относительно направления, определяемого используемым поляризатором. Если молекулы образца ориентированы случайным образом и полностью неподвижны, то каждая субпопуляция, характеризующаяся определенной ориентацией, будет иметь свой уникальный спектр ЭПР или ЯМР, а спектр всего образца будет равен простой сумме этих спектров с учетом их вкладов, определяемых концентрацией

соответствующих молекул. Суммарный спектр называется «порошковым» или «твердостекольным» и обычно весьма широк. Такой спектр сильно отличается от спектра образца, в котором молекулы также ориентированы случайным образом, но характерное время их движений гораздо меньше времени измерения. В рассматриваемых нами примерах соответствующие частоты составляют 105 с-1 для 2Н-ЯМР и 108 с"1 для ЭПР. Каждая молекула, совершающая быстрое

изотропное движение, воспринимает некое среднее магнитное поле, но при этом для всех молекул это среднее поле одинаково, поэтому пики в результирующем спектре очень острые. Примеры ЭПР-спектров приведены на рис. 5.3. Поскольку характерные времена измерения для методов ЭПР и ЯМР различаются, молекула со временем корреляции 106 с будет казаться неподвижной в первом случае и очень быстро движущейся во втором. Метод измерения

деполяризации флуоресценции состоит в том, что образец облучают поляризованным светом и спустя несколько наносекунд регистрируют испускаемый свет. Если молекулы остаются неподвижными в течение времени между процессами поглощения света и его испускания, то поляризация испускаемого света будет определяться в основном поляризацией света возбуждающего. Если же молекула совершает быстрое изотропное вращение, то вектор

напряженности электрического поля испускаемого света не будет иметь предпочтительной ориентации, поскольку поляризация будет равна нулю. Значения поляризации, находящиеся между этими двумя крайними величинами, соответствуют или медленным движениям, при которых популяция молекул не успевает достичь полностью разупорядоченного состояния за время 10-8 с, или быстрым движениям, ограниченным в пространстве и, следовательно, не

допускающим полную разупорядоченность. Все три спектроскопических метода используются для нахождения параметра упорядоченности S: cos20 — это усредненная по времени ориентация молекулы относительно нормали к плоскости мембраны. Время, за которое происходит усреднение, зависит от метода: 10~5 с для 2Н-ЯМР, 10~8 с для ЭПР и деполяризации флуоресценции. В случае 2Н-ЯМР этот параметр чувствителен к медленным движениям, совершающимся за